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荧光光度计的光源和紫外可见

2020-06-30 13:24:29  来源: 每日生物评论

在生物实验中,常常看到可见分光光度计、紫外可见分光光度计、荧光分光光度计。但可能很多人不太清楚它们之间的区别,现将其简要介绍如下。

  一、可见分光光度计与紫外可见分光光度计的区别

  1、仪器分析的波长范围不一样,紫外可见分光光度计的波长范围是:200nm-1000nm,其中200nm-330nm标定为紫外光谱,330nm-800nm标定为可见光谱,800nm-1000nm标定为近红外光谱。而可见分光光度计的波长范围只在可见光谱区内330nm-800nm。

  2、仪器使用的光源不一样,在目前国内外的分光光度计中,大部分紫外光源用的是氘灯,可见光源用的是钨灯,紫外灯源的价格相对可见灯源的价格要高很多,当然也有一些用氙灯替代氘灯和钨灯,其价格更高。

  3、仪器分析物质也不一样,紫外光谱大都分析有机物,可见光谱大都分析无机物,当然也不是绝对的,只是大部分有机物的吸收敏感点在紫外光谱区,无机物的吸收敏感点在可见光谱区。

  4、仪器结构设计不一样,紫外可见分光光度计要求仪器的体积相对可见分光光度计要大一些,这其中除了考虑多了一个灯的摆放位置,还要考虑到灯的散热。

  5、还有仪器其它的一些不一样的,例如:电路设计原理、色散元件、光电转换元器件等。

  6、可见分光光度计一般使用玻璃比色皿即可,而紫外可见分光光度计的紫外区段需使用石英比色皿(最好是黑色石英比色皿,可以遮挡杂光)。

  7、可见分光光度计和紫外可见分光光度计亦可以使用全波段酶标仪代替。

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  二、紫外可见分光光度计与荧光分光光度计的区别

  1、原理不一样。荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。紫外分光光度计是根据朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)光吸收的基本定律,即物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量。通俗的说,荧光分光光度计是测样品中物质被激发出了光能量,紫外分光光度计是测样品中物质吸收了光能量,原理完全不同。

  2、光源不一样。紫外-可见分光光度计在紫外区使用氢灯或氘灯,在可见光区使用氘灯或溴钨灯.它们发出的都是连续光谱,通过三棱镜(中档)、光栅(高档)、滤光片(低级)等分光,这样两种灯组合基本涵盖了紫外-可见光的波长范围. 荧光分光光度计由氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上.

  3、仪器结构不一样。荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外是成一条直线的.

  4、仪器分析的物质不一样。紫外-可见分光光度计可用于大部分有色物质的定量监测,通常需要使用各种各样的显色剂;荧光分光光度计可用于测试发光材料的发射光谱\激发光谱\时间扫描,不需要显色剂,灵敏度比紫外-可见分光光度计高2-3个数量级.

  5、荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面,而紫外仅两面为光学面.



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