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一文了解质谱确定磷酸化位点

2021-01-07 15:01:29  来源: 互联网

 电喷雾质谱仪为英国Micromass公司的电喷雾四极杆正交加速飞行时间串联质谱仪Q-TOF2。配备毛细管液相色谱和纳升喷雾源。镀金属钯的硼硅酸盐电喷雾针(palladiμm-coated borosilicate electrospray needle)(Protana, Odense, Denmark)是一次性使用的专用needle。碰撞气体为氩气。源温80C,锥孔电压50V左右。TOF 加速电压为9.1KV。MCP 检测器电压为2200V。当进行手动测序时,毛细管电压为800-1200V可得到稳定的喷雾。调节碰撞能量和碰撞气体的大小使得到一个好的串联质谱图。该质谱图经Micromass的专用软件MaxEnt3处理后,用Micromass的专用软件MasSeq直接推倒出肽段序列。Nanoflow probe进样毛细管电压为3000v。所有测定均在正离子方式下进行,用Glu-fib(sigma)的串联质谱碎片校正,质量准确度±0.2Da。。

  中性丢失扫描:设定扫描范围400-2000,扫描方式为中性丢失扫描,寻找中性丢失49的双电荷离子。

  基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪为Bruker公司的Autoflex,将样品溶于0.1%TFA中,取1μL与饱和CCA基质上清液混合,取1μL点在Scorce384靶上,送入离子源中进行检测。反射检测方式;飞行管长2.5m;氮激光器:波长337nm;加速电压25KV;检测电压1.6KV;反射电压23KV。校正用Peptide Calibration Standard(Bruker)。


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