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一文教你如何测定氨氮排泄率

2020-06-23 13:36:48  来源: 互联网

 [目的与原理]

  掌握水产动物氨氮排泄率的测定方法,并通过测定鱼类等水生动物的氨氮排泄率来计算蛋白质的代谢率。

  水生生物在进行能量代谢时,消耗体内的蛋白质,蛋白质分解后大部分产物以氨氮形式排入水中,使水中氨氮含量增加,测定一定时间内水中氨氮含量的变化即为氨氮排泄率。

  氨氮量的测定依据游离态的氨或铵离子与纳氏试剂反应,生成黄棕色络合物。该络合物的色度与氨氮的含量呈正比,可用分光光度计测定。

  [试剂与器材]

  试剂:

  1、0.35%的硫代硫酸钠:称取3.5g硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)溶于水,稀释至1000ml。

  2、25%的氢氧化钠溶液

  3、 纳氏试剂:称取16g氢氧化钠溶于50ml水中,冷却至室温。称取7.0g碘化钾和10.0g碘化汞,溶于少量水中。然后将此溶液在搅拌下缓慢加入到氢氧化钠溶液中,用水稀释至100ml,于暗处静置24小时,倾倒出的上层清液,贮存于比色瓶中,在暗处存放。有效期可达一年。

  4、50%的酒石酸钾钠溶液:称取50g酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)溶于水中,煮沸除氨,冷却后用水稀释至100ml。

  5、氯化氨标准贮备液:称取经100~110℃干燥2小时的氯化铵3.8190g溶于水,移入1000ml容量瓶中,稀释至标线,混合均匀。此溶液1.00ml含1.000mg氨态氮。

  6、氯化铵标准溶液:吸取1.00ml氯化铵标准贮备液于1000ml容量瓶中,用水稀释至标线。此溶液1.00ml含0.010mg氨态氮。

  器材:

  水生动物呼吸室,及其耗氧率测定装置,分光光度计,比色管(50ml),比色管架,移液管,10mm比色杯,

  [实验步骤]

  1、安装呼吸室

  2、测定实验开始时水中氨氮值(初氨氮量)及结束时水中氨氮值(末氨氮量),同时记录实验时间

  3、水中氨氮测定方法

  (1)取清洁水样或预处理后的澄清水样50ml于50ml比色管中,加入50%得酒石酸钾钠溶液1.0ml,混合均匀。再加入纳氏试剂1.0ml,摇匀。放置10分钟后进行比色。

  (2)在一组50ml比色管中分别加入氯化氨标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml,加水至标线,按步骤1.显色。

  用10mm比色杯,在波长420nm处以水作参比,测定水样及标准系列的吸光度。同时以50ml水代替水样按与水样完全相同的操作步骤(包括预处理)进行空白试验,并测定其吸光度。

  (3)绘制标准曲线,标准系列所测得的吸光度减去试剂空白(零浓度)的吸光度值,绘制吸光度对氨氮含量(μg)的标准曲线。

  (4)结果计算:

   C N (mg/L) = m/V

  式中m------从标准曲线查得的水样氨氮含量(ug)

   V------水体体积(ml)

  4、氨氮排泄率的计算

  [方法评估]

  这是一种经典的方法,简便、易于操作。

  [应用意义]

  水产动物的排泄氮主要是氨氮,通过测定水产动物的排氨率,可以反映机体对蛋白质的排泄量;另外通过测定排氨率,结合食入氮、粪氮和体内沉积氮的测定,可以研究水产动物的氮收支。

  [注意事项]

  1、操作应在无氨的环境中进行。

  2、氨氮含量大于2mg/L时,水样应先稀释再进行测定。

  3、样品中含有悬浮物,余氯金属离子硫化物和有机物等对测定有干扰,处理方法如下:

  (1)含有余氯的水样加入适量的硫代硫酸钠溶液,每0.5ml可除去0.25mg余氯。

  (2)水样浑浊,有色或含硫化氢或易为碱沉淀的金属离子时,取100ml水样于具塞碘量瓶中,加0.3%硫酸锌溶液1ml和25%氢氧化钠溶液0.1~0.2ml,使水样pH值约为10.5,混合均匀,放置10分钟,用滤纸过滤,弃去2~5ml初滤液后,接取滤液备用。

  (3)加50%酒石酸钾钠溶液络合掩蔽钙镁等金属离子以消除干扰。

  (4)对污染严重的水样,或用凝聚沉淀及络合掩蔽后仍浑浊带色的水样,应采用蒸馏—纳氏试剂分光光度法。




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