• 售后需求
  • 二手仪器
  • 耗材备件
检测家分析仪器租赁平台

咨询热线

400-0660598
首页 >  资讯  >  技术干货  >  PCR实验结果老不对?是不是被耗材拖了后腿?

PCR实验结果老不对?是不是被耗材拖了后腿?

2021-01-15 11:28:13  来源: 德国BRAND

关键词:耗材,温度,单管,PCR,实验,结果



影响PCR实验结果的原因有很多,通常有以下几种:

1、引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度

2、 酶及其浓度 

3、dNTP的质量与浓度

4、模板(靶基因)核酸

5、Mg2+浓度

6、温度与时间的设置

7、循环次数

8、设备、耗材等


在众多影响因素中,耗材是一个非常重要、也极容易被忽视的因素之一。


PCR耗材类型众多:8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边,全裙边,升孔缘等一系列的PCR及qPCR板,选择起来非常困难,在这中间存在许多具有共性的问题。


640(3).jpg



那么,我们一起来看看大家在选用PCR耗材时都遇到了哪些问题,又该如何解决呢?




常见问题及解决办法



PCR耗材为什么一般都是PP材质的?


PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质,因其为生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性(可121度高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。


不同体积的PCR 管/板,该怎么选择?


PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上,优先推荐选用低容管哦。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时,需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而加样过少可能会造成样品蒸发损失。大家可依据具体的实验要求选用更合适的产品。


常见反应管规格及体积:

  • 单管/联管:0.5mL,0.2mL, 0.15mL

  • 96孔板:0.2mL, 0.15mL

  • 384孔板:0.04mL


为什么有的PCR管是平盖,有的是凸盖?


当样品量较少时,都会优先选用单管或者连管。但是当反应体积需求较大时,单管可达到0.5mL呢。平盖和凸盖各有优点呢,可参考下面的信息。


640(4).jpg



不同颜色的PCR 管/板,该怎么选择?


对于普通的PCR反应选用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于进行样品分类管理。


640(5).jpg


但qPCR更推荐选用优质的白色PCR耗材。


由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度,更需要灵敏、精确的荧光信号传递。与传统的透明PCR产品相比,白色PCR产品可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量PCR的结果。


640(6).jpg



PCR板/管材质厚度不一,是不是厚点的稳定性更好?


一般分为无裙边、半裙边、全裙边。


640(7).jpg


  • 无裙边板:

    适用于大多数的PCR仪或qPCR仪,但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高,需要配合板托使用。

  • 半裙边板:

    可适配标签或应用条码,及自动化应用,且有着较好的移液稳定性。全裙边板:非常适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的PCR仪,且移液过程中稳定性高。


96和384孔板切角和标识不同?


  • A切角:

    PCR板的切角位置选择取决于适配仪器要求,便于定位。

  • B标识:

    PCR板的数字字母标记有助于识别单个孔及样品位置。一般为凸出的颜色数字标识或者印刻标识。对于一些自动化应用实验,印刻标记的反应板密封性会更好。


640(8).jpg



为什么有的PCR板孔缘是升起的?


常见的PCR板有平孔缘和加高孔缘两种。


640(9).jpg


平孔缘的反应板,可适用于大多数的PCR仪。

升孔缘的反应板,便于封膜,可降低样品间的交叉污染风险。


PCR封板膜有多种类型,哪种好?


根据具体的PCR实验要求选用适配的高质量封板膜,不仅有效保护样品,防止污染,还提供可信赖的实验检测数据。


640(10).jpg



文章素材来源:德国BRAND、实验与分析,侵删



--------------------------


推荐阅读:


1、高效液相色谱仪 故障快速诊断排查!

2、各种实验室温度的控制要求,全了!

分享到:

关注检测家

新闻资讯
技术干货
一手掌握
关于检测家| 帮助中心| 客服中心| 服务条款

© 2015-2020 easylabplus.com 版权所有 ICP证:浙ICP备15009672号-2技术支持:悦阁科技 浙公网安备 33010502005894号 第二类医疗器械经营备案凭证:浙杭食药监械经营备20192023号

友情链接: 北京大学开放实验室  高温炉  国家标准物质中心  工程检测仪器设备  国际认证  分析测试百科网  浙里检  手持式VOC气体检测仪  氧化镁  TUV认证  实验仪器网  我要测 

发布需求

在线客服

官方微信

客服电话

400-0660598

返回顶部