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一文读懂基因纯化回收原理

2021-03-24 11:22:59  来源: 互联网

融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。

  1.低熔点琼脂糖挖块法:在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后,其凝固点温度降为30度,熔化温度为65度,这一温度低于绝大多数双链DNA的变性温度,利用这类凝胶纯度高熔点低的特点,在水平式琼脂糖凝胶电泳上,使所需的目的DNA片段转移到低熔点琼脂糖凝胶内,经65度水浴5-10分钟,使之溶化,用饱和酚抽提,就可以分离到所需DNA.

  2.玻璃棉离心法:利用玻璃棉为支持介质,通过离心,使含有目的基因DNA片段的溶液从凝胶中析出,经离心管底部的小孔流入套管,再用酚纯化、乙醇沉淀,获得所需的目的基因片段。

  3.透析袋电泳法:与常规琼脂糖电泳原理相同,将含有目的基因片段的凝胶切下来,装入透析袋中,同时装入电泳缓冲液,再按常规电泳方法电泳,让DNA在透析袋内走出凝胶块,再纯化缓冲液中的DNA片段。

  4.DEAE纤维素纸片回收法:将这种纸片插入到琼脂糖凝胶,其位置正好在回收的DNA条带的前方,使DNA向纸片方向泳动并吸附在纸片上,然后把纸片取出再用洗脱液洗脱吸附的DNA

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